Esperimentuaren printzipioa
Hemoglobina elektroforesiak hainbat hemoglobina normal eta anormal detektatu eta berrestea du helburu.
Hemoglobina mota ezberdinen karga eta puntu isoelektriko desberdinak direla eta, pH-ko soluzio tampon jakin batean, hemoglobinaren puntu isoelektrikoa tampon-disoluzioaren pHa baino baxuagoa denean, hemoglobinak karga negatiboa darama eta anodorantz migratzen du elektroforesian. Alderantziz, karga positiboa duen hemoglobina katodorantz mugitzen da.
Tentsio jakin baten azpian eta elektroforesi-denbora zehatz baten ondoren, karga eta pisu molekular desberdinak dituzten hemoglobinek migrazio-norabide eta abiadura desberdinak erakusten dituzte. Horrek zonalde desberdinak bereiztea ahalbidetzen du, eta geroko miaketa kolorimetriko edo elektroforetikoko analisiak egin daitezke zona horietan hainbat hemoglobina kuantifikatzeko. Gehien erabiltzen den metodoa pH 8,6 zelulosa azetato mintzaren elektroforesia da.
Zitoplasmaren barruan, glukogeno edo polisakarido substantzietan (adibidez, mukopolisakaridoak, mukoproteinak, glikoproteinak, glikolipidoak, etab.) dauden etilenglikol taldeak (CHOH-CHOH) azido periodikoaren bidez oxidatu eta aldehido taldeetan (CHO-CHO) bihurtzen dira. Aldehido talde hauek Schiff erreaktibo more-gorri koloregabearekin konbinatzen dira, zelula polisakaridoak dauden lekuetan metatzen den koloratzaile more-gorri bat osatuz. Erreakzio hau azido-Schiff (PAS) tindaketa periodikoa bezala ezagutzen da, lehenago glukogenoaren tindaketa deitzen zitzaiona.
Esperimentu metodoa
Materialak:Zelulosa azetatoamembrana, elektroforesi aparatua(DYCP-38C eta DYY-6C elikadura hornidura), Goi-mailako laginak kargatzeko tresna (pipeta), espektrofotometroa, kubeta kolorimetrikoak, bufferak.
Buffer:
(1) pH 8,6 TEB Buffer: Pisatu 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g azido borikoa eta gehitu ur destilatua 1000 ml-ra.
(2) Borato Buffer: pisatu 6,87 g borax eta 5,56 g azido borikoa, eta gehitu ur destilatua 1000 ml-ra.
Prozedura:
PHemoglobina soluzioaren konponketa
Hartu heparina edo sodio zitratoa duen 3 ml odol antikoagulatzaile gisa. Zentrifugatu 2000 rpm-an 10 minutuz eta bota plasma. Globulu gorriak hiru aldiz garbitu gatz fisiologikoarekin (750 rpm, 5 minutuko zentrifugazioa bakoitzean). Zentrifugatu 2200 rpm-an 10 minutuz eta bota gainditzailea. Gehitu ur destilatu kopuru berdina, eta gehitu karbono tetrakloruroaren bolumena 0,5 aldiz. Astindu indarrez 5 minutuz, eta gero zentrifugatu 2200 rpm-an 10 minutuz goiko Hb disoluzioa biltzeko gero erabiltzeko.
Mintza bustitzea
Moztu zelulosa azetatoaren mintza 3 cm × 8 cm-ko zerrendatan. Beratzen itzazu pH 8,6 TEB tamponean guztiz saturatu arte, ondoren kendu eta lehortu iragazki paperarekin.
Spotting
Erabili pipeta bat hemoglobina disoluzioaren 10 μl bertikalki zelulosa azetatoaren mintzean (alde zakarra), ertzetik 1,5 cm ingurura.
Elektroforesia
Borato buffer disoluzioa elektroforesi-ganberara bota. Jarri zelulosa azetatoaren mintza ganberaren katodoaren muturrean dagoen alde orbanarekin. Exekutatu 200 V-tan 30 minutuz.
Eluzioa
Moztu HbA eta HbA2 eremuak, jarri saio-hodi bereizietan eta gehitu 15 ml eta 3 ml ur distilatu, hurrenez hurren. Astindu astiro-astiro hemoglobina guztiz kentzeko, eta gero nahastu.
Kolorimetria
Zeroratu xurgantzia disoluziorako ur destilatua erabiliz eta neurtu xurgantzia 415 nm-tan.
Kalkulua
HbA2 (%) = HbA2 hodiaren xurgapena / (HbA hodiaren xurgapena × 5 + HbA2 hodiaren xurgapena) × % 100
Emaitzen esperimentalen kalkulua
pH 8,6 TEB Buffer Zelulosa Azetato Elektroforesiaren erreferentzia-tartea: HbA > %95, HbA2 %1-3,1
Oharrak
Elektroforesiaren denbora ez da luzeegia izan behar. Zelulosa azetato mintza ez da lehortu behar elektroforesian. Gelditu elektroforesia HbA eta HbA2 argi bereizten direnean. Elektroforesi luzeak banda difusioa eta lausotzea eragin dezake.
Saihestu lagin gehiegi erabiltzea. Gehiegizko hemoglobina-likidoak banda askatzea edo nahikoa ez tindatzea ekar dezake, eta ondorioz, HbA maila faltsuki igotzen da.
Saihestu zelulosa azetatoaren mintza proteinekin kutsatzea.
Korronteak ez du altuegia izan behar; bestela, baliteke hemoglobina-bandak ez bereiztea.
Sartu beti pertsona arrunten aleak eta beharrezkoak diren hemoglobina anormal ezagunak kontrol gisa.
Beijing Liuyi Biotechnology-k eredu den hemoglobina elektroforesirako elektroforesi tanga profesionala fabrikatzen du.DYCP-38Czelulosa azetato mintza elektroforesi depositua, eta elektroforesi elikadura hornidura bi modelo daude eskuragarri zelulosa azetato mintz elektroforesi deposituaDYY-2CetaDYY-6Celikadura hornidura.
Bien bitartean, Beijing Liuyi Biotechnology-k zelulosa azetato mintza eskaintzen die bezeroei, eta zelulosa azetato mintzaren tamaina pertsonalizatu daiteke. Ongi etorri laginak eta informazio gehiago eskatzera.
Beijing Liuyi markak 50 urteko historia baino gehiago du Txinan eta konpainiak produktu egonkorrak eta kalitate handikoak eskain ditzake mundu osoan. Urteetako garapenaren bidez, zure aukera merezi du!
Orain bazkide bila gabiltza, bai OEM elektroforesi depositua eta banatzaileak ongi etorriak dira.
Gure produktuak erosteko planik baduzu, ez izan zalantzarik eta jar zaitez gurekin harremanetan. Mezua posta elektronikora bidal diezagukezu[posta elektronikoa babestuta]edo[posta elektronikoa babestuta], edo deitu +86 15810650221 telefonora edo gehitu Whatsapp +86 15810650221, edo Wechat: 15810650221
Argitalpenaren ordua: 2023-09-20