Zer da poliakrilamida gel elektroforesia?

Poliakrilamida Gel Elektroforesia

Gel-elektroforesia oinarrizko teknika da diziplina biologikoetako laborategietan, DNA, RNA eta proteinak bezalako makromolekulak bereizteko aukera ematen duena. Bereizketa medio eta mekanismo ezberdinek molekula hauen azpimultzoak modu eraginkorragoan bereiztea ahalbidetzen dute haien ezaugarri fisikoak baliatuz. Proteinentzat bereziki, poliakrilamida gel elektroforesia (PAGE) da askotan aukeratutako teknika.

PAGE proteinak bezalako makromolekulak bereizten dituen teknika bat da, haien mugikortasun elektroforetikoaren arabera, hau da, analitoek kontrako kargako elektrodo batera joateko duten gaitasunaren arabera. PAGE-n, molekularen kargaren, tamainaren (pisu molekularra) eta formaren arabera zehazten da. Analitoak poliakrilamida gelan osatutako poroetatik mugitzen dira. DNA eta RNA ez bezala, proteinak karga aldatu egiten dira sartutako aminoazidoen arabera, eta horrek funtzionatzen duen modua eragin dezake. Aminoazido-kateek egitura sekundarioak ere sor ditzakete, itxurazko tamainan eta, ondorioz, poroetatik mugitzeko gai diren. Horregatik, batzuetan komenigarria izan daiteke elektroforesiaren aurretik proteinak desnaturalizatzea horiek linealizatzeko, tamainaren estimazio zehatzagoa behar bada.

SDS ORRIA

Sodio-dodecil sulfato poliakrilamida gel elektroforesia 5 eta 250 kDa-ko masetako proteina molekulak bereizteko teknika bat da. Proteinak beren pisu molekularraren arabera bakarrik bereizten dira. Sodio dodecil sulfatoa, tensioaktibo anionikoa, proteina laginen berezko kargak ezkutatzen dituen gelak prestatzean gehitzen da eta karga eta masa erlazio antzekoa ematen die. Hitz sinpleetan, proteinak desnaturalizatzen ditu eta karga negatiboa ematen die.

Bertako ORRIA

Native PAGE proteinak bereizteko gel desnaturalizatuak erabiltzen dituen teknika da. SDS PAGE ez bezala, gelak prestatzerakoan ez da agente desnaturalizatzailerik gehitzen. Ondorioz, proteinen kargaren eta tamainaren arabera egiten da proteinen bereizketa. Teknika honetan, proteinen konformazioa, tolestura eta aminoazido-kateak dira bereizketa horren menpeko faktoreak. Proteinak ez dira hondatzen prozesu honetan, eta bereizketa amaitu ondoren berreskura daitezke.

Nola funtzionatzen du poliakrilamida gel elektroforesiak (PAGE)?

PAGEren oinarrizko printzipioa analitoak bereiztea da, korronte elektrikoa erabiliz poliakrilamida gel baten poroetatik pasatuz. Hori lortzeko, akrilamida-bisakrilamida nahasketa bat polimerizatzen da (poliakrilamida) amonio persulfatoa (APS) gehituz. Erreakzioak, tetrametiletilendiaminak (TEMED) katalizatzen duen, sare bat osatzen du, analitoak mugi daitezkeen poroekin (2. irudia). Gelan sartutako akrilamida osoaren portzentajea zenbat eta handiagoa izan, orduan eta txikiagoa izango da poroaren tamaina, beraz, orduan eta txikiagoak izango dira igaro ahal izango diren proteinak. Akrilamida eta bisakrilamida proportzioak ere eragina izango du poroen tamainan, baina hau konstante mantentzen da. Poroen tamaina txikiagoek proteina txikiek gelan zehar mugitzeko duten abiadura murrizten dute, haien bereizmena hobetuz eta korrontea aplikatzen denean bufferera azkar isurtzea saihestuz.

Poliakrilamida Gel Elektroforesirako ekipoak

Gel-elektroforesi-zelula (depositua/ganbera)
Poliakrilamida gel elektroforesirako (PAGE) gel depositua agarosa gel depositua desberdina da. Agarosa gel depositua horizontala da, PAGE depositua, berriz, bertikala. Elektroforesi zelula bertikalaren bidez (tanga/ganbara), gel mehe bat (normalean 1,0 mm edo 1,5 mm) beirazko bi plaken artean isurtzen da eta muntatzen da, horrela gelaren behealdea buffer batean murgiltzen da ganbera batean eta goikoa buffer batean murgiltzen da. beste ganbera batean. Korrontea aplikatzen denean, buffer kopuru txiki bat gelan zehar migratzen da goiko ganberatik beheko ganberara. Muntaia posizio tente mantentzen dela bermatzeko besarkada sendoekin, ekipamenduak gelaren ibilaldi azkarrak errazten ditu, hozte berdinarekin, banda desberdinen ondorioz.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.-k (Liuyi Biotechnology) poliakrilamida gel-elektroforesi-zelulen (tanga/ganberak) tamaina ugari fabrikatzen ditu. DYCZ-20C eta DYCZ-20G ereduak elektroforesi zelula bertikalak dira (tanga/ganberak) DNA sekuentziatzeko analisirako. Elektroforesi zelula bertikal batzuk (tanga/ganberak) blotting sistemarekin bateragarriak dira, hala nola DYCZ-24DN, DYCZ-25D eta DYCZ-25E ereduak Western Blotting sistema DYCZ-40D, DYCZ-40G eta DYCZ-40F modeloarekin bateragarriak dira, proteina molekula geletik mintzera pasatzeko erabiltzen direnak. SDS-PAGE elektroforesiaren ondoren, Western Blotting proteina nahaste batean proteina zehatz bat detektatzeko teknika bat da. Blotting sistema hauek aukera esperimentalen eskakizunen arabera aukeratu ditzakezu.

Elektroforesiaren elikadura iturria
Gela martxan jartzeko elektrizitatea hornitzeko, elektroforesiaren hornikuntza bat beharko duzu. Liuyi Biotechnology-n elektroforesiaren hornikuntza sorta bat eskaintzen dugu aplikazio guztietarako. Tentsio eta korronte egonkorrak dituzten DYY-12 eta DYY-12C modeloak tentsio handiko eskakizunen elektroforesia bete dezake. Stand, kronometraje, VH eta urratsez urrats aplikazioaren funtzioa du. IEF eta DNA sekuentziatzeko elektroforesiaren aplikaziorako aproposak dira. Proteinen eta DNA elektroforesiaren aplikazio orokorrerako, DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 eta abar ereduak ditugu, elektroforesi-zelulak (tankeak/ganberak) dituzten salmenta-iturri beroak ere badira. Hauek tentsio ertaineko eta baxuko elektroforesi aplikazioetarako erabil daitezke, hala nola, eskola laborategia erabiltzeko, ospitaleko laborategia eta abar. Elikatze-iturrien eredu gehiago, mesedez bisitatu gure webgunea.

Liuyi markak 50 urteko historia baino gehiago du Txinan eta konpainiak produktu egonkorrak eta kalitate handikoak eskain ditzake mundu osoan. Urteetako garapenaren bidez, zure aukera merezi du!

Guri buruzko informazio gehiago lortzeko, jar zaitez gurekin harremanetan posta elektronikoz[posta elektronikoa babestuta] or [posta elektronikoa babestuta].

Zer da poliakrilamida gel elektroforesia?
1. Karen Steward doktorea Poliakrilamida gel elektroforesia, nola funtzionatzen duen, teknika aldaerak eta bere aplikazioak